一場疫情，讓我們對生物安全有了更多認識和更深刻理解，實驗室生物安全也越來越被人們所重視。習近平總書記在中共中央政治局就加強我國生物安全建設第三十三次集體學習中指出，要加強對國內病原微生物實驗室生物安全的管理，嚴格執行有關標準規范，嚴格管理實驗樣本、實驗動物、實驗活動廢棄物。

生物安全實驗室是進行生物安全操作的主要陣地，生物安全柜是生物安全實驗中的重要裝備。我們就大家比較關心的醫療機構生物安全，特別是生物安全柜的相關知識進行了梳理，上期重點分享了生物安全柜、加強型生物安全二級實驗室等相關定義和病原微生物分類、生物安全實驗室防護水平分級、生物安全柜分類等。本期重點分享生物安全柜的管理。

一、日常使用生物安全柜時的注意事項

1. 生物安全柜的垂直可移動窗開啟與關閉應輕便，在行程范圍內的任何位置不產生卡死現象，不應有明顯的左右或前后晃動現象，滑動應順暢。開關、按鍵的操作應靈活可靠，零部件應緊固無松動，指示正確。

2. 工作前預先放好實驗材料、只放入實驗必需的實驗材料和物品，防止生物安全柜過載。可高壓滅菌的收集生物危害性實驗廢棄物的容器、消毒劑及配套的消毒工具也應放人安全柜內，以避免操作者的手臂在玻璃懸窗進口處快速移動或頻繁進出干擾安全柜內的氣流，降低了對檢驗人員和物品的防護。

3. 實驗材料和物品應按照從清潔區、半污染區到污染區的方向順序擺放，三個區域之間應無交叉，操作過程中應方便拿取，以避免交叉污染。

4. 放置到生物安全柜內的實驗用材料和物品應用70%的酒精或其他中性消毒劑擦拭表面清除污染，以避免污染的物品放人生物安全柜。

5. 可能產生氣溶膠的設備，如混勻器、離心機等應放置在生物安全柜的后部，離心機不得被放置在I級和Ⅱ級生物安全柜內。

6. 實驗材料和物品應盡可能的放置在靠近生物安全柜工作臺面后邊緣且不遮擋前部、后部和側部進氣格柵的位置。體積較大的實驗材料和物品，如盛放吸管的盤子、抽濾瓶等彼此間應留有距離，并放在生物安全柜內的一側避免在實驗期間移動。不阻斷前后空氣格柵、減少干擾氣流。避免使用干擾生物安全柜內氣流流動的設備和實驗步驟

7. 操作人員的雙臂以垂直方向緩慢伸入生物安全柜內，至少等待1min使生物安全柜內的氣流穩定后再進行操作，以避免干擾安全柜內的氣流流動。

8. 在工作區域工作、生物安全柜處于正常工作狀態時，不應有明顯的機震聲。

9. 進行實驗操作時應使用恰當的操作方法盡量減少濺灑或者氣溶膠的產生，如有溢出及時清潔和消毒溢出。

10. 最好用一次性接種環、電加熱器滅菌接種環。

11. 實驗完畢具有潛在生物危害的實驗材料和物品應消除表面污染，使用可滅菌的廢棄物處理袋封裝后移出生物安全柜，放入高壓滅菌鍋或其他滅菌裝置滅菌處理。

12. 不宜在生物安全柜內使用明火，明火易造成氣流動蕩，破壞高效過濾（HEPA）起源吹向臺面的模式。

13. 在關閉安全柜前應繼續運行至少5分鐘。

14. 按照使用說明書指導正確使用和維修。

二、清潔消毒

1. 工作前的自凈和消毒

   A.在工作前要讓生物安全柜的風機至少運行3-5分鐘，使柜內的空氣實現自凈。

   B.安全柜的工作臺面、內壁（不包括送風濾器擴散板）和觀察窗的內表面使用70%酒精或其他中性消毒劑擦拭。消毒后再用無菌水或蒸餾水進行擦拭以清除殘余消毒劑。

   C.放到安全柜的容器和材料的表面使用70%乙醇擦拭，以減少將環境的污染物帶到安全柜內。

   D.定期對孵箱和冰箱進行消毒。

2. 工作結束時的表面消毒

   工作完成時，應對所有的容器和設備進行表面消毒并拿出安全柜。每天工作結束時，對安全柜進行最后的表面消毒，包括工作臺面、安全柜的邊壁、后壁、玻璃懸窗內外側、紫外線燈管和電源輸出口以及包括試驗設備在內的所有物品。消毒劑可選擇70%酒精或其他中性消毒劑。

在進行安全柜內部消毒時，操作人員除了手臂以外的 任何部位不得進入生物安全柜內。

三、應急處置

1. 一般要求

   A.實驗開始前，應開啟風機和氣流指示器(如果有)等，確認生物安全柜均處于“安全”狀態，如有任何故障應立即停止工作，并報告實驗室主任。

   B.實驗開始前，操作人員應提前準備好所用應急物品，如危害物溢出應急處置物品，適宜消毒劑、毛巾、紙巾和可滅菌的廢棄物處理袋等，放在隨時拿到投人使用的位置。

   C.生物安全柜運行時，發生任何氣流異常等報警，應立即停止工作，立即報告實驗室主任。

2. 溢出物應急處置

   （1）發生少量噴灑時的清潔消毒

   在生物安全柜內發生少量(體積小于1ml)的噴灑時，立即用吸水紙巾進行處理，將使用過的紙巾放到生物危害包里。并根據污染物的類型選擇適宜的消毒劑擦洗臺面及內部所有可能受污染的物品。

   （2）發生大量溢出或容器破碎時的清潔消毒

   a)在生物安全柜保持運行狀態，等待至少5min;

   b)如操作人員的手套或防護服已經被污染，應在生物安全柜內對手套消毒后，脫下手套，帶上新手套后脫掉所污染的防護服，用適當的消毒劑清洗暴露部位；

   c)操作人員穿防護服、戴手套和眼罩，先用吸水紙巾吸收溢出物，再用浸有消毒劑的毛巾來覆蓋溢出物，作用一段時間把氣溶膠的產生控制到最小化；

   d)對于溢出中等或高風險的物質，在確保排水閥關閉后，用消毒劑浸泡工作臺面和排水溝，讓液體通過格柵流到集水槽上，收集廢液后再徹底清洗集水槽。當有危險等級為2和3的高風險物質溢出，需由有資質的人員使用甲醛熏蒸法來消毒生物安全柜；

   e)覆蓋溢出物的毛巾、所有柜內操作過的物品和被污染的實驗材料都應使用可滅菌的廢棄物處理袋封裝后移出安全柜，高壓滅菌或采用其它有效的滅菌方法進行處理，不適用高壓滅菌應用消毒滅菌劑擦拭至少20min徹底清除表面污染；破碎的玻璃或其他銳器要用鑷子或鉗子處理；

   f)用消毒劑擦拭生物安全柜內壁、工作表面以及玻璃懸窗內側，作用一定時間后，用潔凈水擦干凈消毒劑殘留；

   g)處理完畢操作人員應更換污染的防護服及手套，封裝后按照實驗室醫療廢物進行處理，并用肥皂和清水清洗手和暴露的皮膚；

   h)全部步驟結束后生物安全柜應繼續運行2min~3min以清除工作區域內浮塵污染；

   i)再次使用前生物安全柜應至少運行15min再開始實驗操作。

   （3）如果溢灑物流人生物安全柜內部或需要浸泡集水槽，在清理前應報告設備管理員，需要評估后再采取適當的措施。

四、日常維護

1. 定期清潔操作臺面和前窗玻璃；

2. 保持室內空氣質量,延長高效過濾器使用壽命；

3. 定期檢測紫外燈的照射強度,及時更換燈管；

4. 長期不用應定期進行維護性運行；

5. 高效過濾器應定期檢測，及時更換；

6. 做好使用和維護記錄。

五、生物安全柜的檢測要求

1. 根據WS 233-2002《微生物和生物醫學實驗室生物安全通用準則》的相關規定，有下列情況之一時，必須對生物安全柜進行現場檢測：

   （1）生物安全實驗室竣工后，投入使用前，生物安全柜已安裝完畢；

   （2）生物安全柜被移動位置后。

   （3）生物安全柜進行檢修后。

   （4）生物安全柜更換高效過濾器后。

   （5）生物安全柜一年一度的常規現場檢測

2. 依據SNT3901-2014《生物安全柜使用和管理規范》，在生物安全柜的檢定周期內應至少開展1次生物安全柜的期間核查，實驗室可根據生物安全柜的使用頻次和實驗室所開展的檢測工作的危害程度增加期間核查次數。期間核查的內容至少應包括垂直氣流平均風速、工作窗口氣流流向、潔凈度。

小結

生物安全柜在實驗室生物安全防護上有著重要的作用，只有規范其使用管理，才能充分發揮生物安全柜的防護性能，規避感染風險，實現真正意義上的實驗室生物安全。

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